ไซติซีน (หรือเรียกอีกอย่างว่าบัพติศมาซิน) เป็นอัลคาลอยด์สำคัญที่สกัดจากพืชตระกูลถั่ว เช่น *Sophora alopecuroides* และ *Thermopsis lanceolata* มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านเภสัชกรรม การคุ้มครองพืช และสารชีวภาพ ความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์จะเป็นตัวกำหนดประสิทธิภาพการใช้งานและการปฏิบัติตามกฎระเบียบโดยตรง ในปัจจุบัน วิธีการทางอุตสาหกรรมสำหรับการทดสอบความบริสุทธิ์ของไซติซีนแบ่งออกเป็นสามประเภทตามความแม่นยำ ต้นทุน และสถานการณ์การใช้งาน: การทดสอบเชิงคุณภาพอย่างรวดเร็ว การทดสอบเชิงปริมาณตามปกติ และ-การกำหนดเชิงปริมาณที่มีความแม่นยำสูง วิธีการที่แตกต่างกันเหมาะกับรูปแบบตัวอย่างที่หลากหลาย เช่น สารสกัดหยาบ ผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปทางอุตสาหกรรม และมาตรฐานอ้างอิง ต่อไปนี้จะสรุปขั้นตอนการทดสอบทั่วไปในอุตสาหกรรมและประเด็นสำคัญ
I. Thin-Layer Chromatography (TLC): การคัดกรองเชิงคุณภาพอย่างรวดเร็ว เหมาะสำหรับการทดสอบเบื้องต้นของผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบ
TLC เป็นวิธีคัดกรองอย่างรวดเร็วที่ใช้กันมากที่สุดในระหว่างการผลิตและการสกัดไซติซีน ใช้งานง่ายและคุ้มค่า- โดยทำหน้าที่ตรวจสอบการมีอยู่ของไซติซีนเป็นหลักและดำเนินการประเมินเบื้องต้นของสิ่งเจือปน เหมาะสำหรับการคัดกรองความบริสุทธิ์เบื้องต้นของสารสกัดวัตถุดิบและผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบ แต่ไม่สามารถให้ปริมาณที่แม่นยำได้
ขั้นตอนการปฏิบัติงานหลัก: ขั้นแรก เตรียมเพลต TLC ของซิลิกาเจลอัลคาไลน์โดยการผสมซิลิกาเจล G กับสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ให้เป็นเนื้อครีม เกลี่ยให้เท่ากัน เปิดใช้งานที่อุณหภูมิ 105 องศาเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง แล้วปล่อยให้เย็นเพื่อใช้งาน จากนั้น ละลายตัวอย่างที่จะทดสอบและมาตรฐานอ้างอิงไซติซีนในเมทานอลเพื่อเตรียมสารละลายทดสอบและสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นที่เหมาะสม จากนั้นชี้สิ่งเหล่านั้นลงบนเพลต TLC ใช้ระบบตัวทำละลายของเบนซีน-อะซิโตน-เอทิลอะซิเตต-เมทานอล (4:2:1:1) เป็นตัวช่วยพัฒนา และปล่อยให้ส่วนหน้าของตัวทำละลายขึ้นไปยังความสูงที่ตั้งไว้ สุดท้าย นำแผ่นออก ปล่อยให้อากาศ-แห้ง แล้วฉีดด้วยรีเอเจนต์ของ Dragendorff ที่ดัดแปลงแล้ว (โพแทสเซียม บิสมัท ไอโอไดด์) เพื่อให้เห็นภาพ
การตีความผลลัพธ์: หลังจากการมองเห็น ให้สังเกตตำแหน่งและความชัดเจนของจุด ตัวอย่างที่สอดคล้องจะแสดงจุดที่มีสีสม่ำเสมอและไม่มีจุดภายนอกที่มีนัยสำคัญ โดยมีค่า Rf ที่ตรงกับค่าของมาตรฐานอ้างอิง (ค่า Rf มาตรฐานอุตสาหกรรม-คือประมาณ 0.23) การปรากฏตัวของจุดภายนอก หาง หรือการเบี่ยงเบนที่สำคัญในค่า Rf บ่งชี้ว่ามีปริมาณสิ่งเจือปนสูงและไม่เป็นไปตามมาตรฐานความบริสุทธิ์ วิธีการนี้มีข้อจำกัดที่สำคัญ: ให้เฉพาะการวิเคราะห์เชิงคุณภาพหรือกึ่ง-เชิงปริมาณเท่านั้น ไม่สามารถระบุค่าความบริสุทธิ์ที่เฉพาะเจาะจงได้อย่างแม่นยำ และให้ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้องอย่างมากสำหรับตัวอย่างที่มีระดับสิ่งเจือปนสูง
ครั้งที่สอง โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง- (HPLC): วิธี-วิธีเชิงปริมาณมาตรฐานอุตสาหกรรมที่เหมาะสำหรับผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปทางอุตสาหกรรม
ปัจจุบัน HPLC เป็นวิธีมาตรฐานในการทดสอบความบริสุทธิ์ของไซติซีนของวัตถุดิบระดับอุตสาหกรรม-และเชิงพาณิชย์ มีความแม่นยำและความสามารถในการทำซ้ำสูง ช่วยให้สามารถกำหนดค่าความบริสุทธิ์เฉพาะได้อย่างแม่นยำ เหมาะสำหรับผลิตภัณฑ์ที่ผ่านการกลั่นแล้วซึ่งมีความบริสุทธิ์เกิน 90% และทำหน้าที่เป็นวิธีการหลักในการควบคุมคุณภาพองค์กรและ-การทดสอบตลาดโดยบุคคลที่สาม
สภาวะโครมาโตกราฟีมาตรฐานอุตสาหกรรม: ใช้คอลัมน์ C18 (250 มม. × 4.6 มม., 5 μm) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยระบบที่ประกอบด้วยสารละลายโซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 0.05 โมล/ลิตร เมทานอล และแอมโมเนียมเปอร์คลอเรต (15 มล. : 85 มล. : 0.5 กรัม) พารามิเตอร์การทำงานประกอบด้วยอัตราการไหลคงที่ 1.0 มล./นาที ความยาวคลื่นการตรวจจับ 305 นาโนเมตร อุณหภูมิคอลัมน์ 25 องศา และปริมาตรการฉีด 10 ไมโครลิตร ภายใต้สภาวะเหล่านี้ พีคของไซติซีนมีความสมมาตรและมีความละเอียดที่ดี สามารถแยกสิ่งเจือปนอัลคาลอยด์ทั่วไปได้อย่างมีประสิทธิภาพ
ขั้นตอนการทดสอบภาคปฏิบัติ: ขั้นแรก การปรับสภาพตัวอย่าง-ตัวอย่างของแข็งจะต้องทำให้แห้งที่ 105 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงเพื่อให้มีน้ำหนักคงที่ เพื่อขจัดการแทรกแซงของความชื้น หลังจากการชั่งน้ำหนักที่แม่นยำ ตัวอย่างจะถูกละลายในเมทานอลผ่านอัลตราโซนิก ซึ่งสร้างเป็นปริมาตร และกรองผ่านเมมเบรนอินทรีย์ 0.45 μm ประการที่สอง การเตรียมเส้นโค้งมาตรฐาน-สารละลายมาตรฐานของไซติซีนที่มีความเข้มข้นต่างกันจะถูกเตรียมและฉีด เส้นโค้งมาตรฐานถูกพล็อตด้วยพื้นที่พีคบนแกน y- และความเข้มข้นบนแกน x- ซึ่งแสดงให้เห็นความเป็นเชิงเส้นที่ดีภายในช่วง 0.04–1.2 มก./มล. ประการที่สาม การวิเคราะห์ตัวอย่าง-สารละลายทดสอบจะถูกฉีด พื้นที่พีคจะถูกบันทึก และปริมาณไซติซีนจะถูกคำนวณโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานเพื่อกำหนดความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย
วิธีการนี้หลีกเลี่ยงการรบกวนจากสิ่งเจือปนทั่วไปได้อย่างมีประสิทธิภาพ และให้ผลลัพธ์ที่มีข้อผิดพลาดน้อยที่สุด ตรงตามข้อกำหนดทั้งหมดสำหรับการผลิตทางอุตสาหกรรม การควบคุมคุณภาพ และการสุ่มตัวอย่างเป็นชุด โดยทำหน้าที่เป็นพื้นฐานสำหรับการทดสอบความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปของไซติซีน (ความบริสุทธิ์มากกว่าหรือเท่ากับ 98%) ทั่วทั้งอุตสาหกรรม
ที่สาม โครมาโตกราฟีของเหลว-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS): การวิเคราะห์ร่องรอยที่แม่นยำซึ่งเหมาะสำหรับเมทริกซ์ที่ซับซ้อน
LC-MS/MS เป็นวิธีการตรวจจับที่มีความแม่นยำสูง-ซึ่งใช้เป็นหลักในการกำหนดความบริสุทธิ์และปริมาณของไซติซีนในตัวอย่างที่ซับซ้อน เช่น วัตถุดิบจากพืช สารเตรียมทางชีวภาพ และเมทริกซ์อาหาร มีความสามารถในการแยกและการตรวจจับที่เหนือกว่า HPLC มาตรฐานมากสำหรับตัวอย่างที่มีสารเจือปนที่ซับซ้อนหรือปริมาณติดตามของสารวิเคราะห์ มักใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ การกำหนดคุณค่าของผลิตภัณฑ์ระดับไฮเอนด์- และการตรวจสอบความถูกต้อง
ขั้นตอนการทำงานหลักเกี่ยวข้องกับการสกัดตัวอย่างโดยใช้อะซิโตไนไตรล์ที่เป็นกรด ตามด้วยการทำให้บริสุทธิ์ด้วยคอลัมน์-การแยกเฟสที่เป็นของแข็ง (SPE) เพื่อกำจัดสารที่รบกวน เช่น เม็ดสี โพลีแซ็กคาไรด์ และอัลคาลอยด์ที่เกี่ยวข้อง การตรวจจับดำเนินการโดยใช้โหมดการตรวจสอบปฏิกิริยาหลายปฏิกิริยา (MRM) ช่วยให้สามารถแยกแยะความแตกต่างระหว่างไซติซีนกับสิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้องกับโครงสร้างที่คล้ายกันได้อย่างแม่นยำ ด้วยขีดจำกัดการตรวจจับที่ต่ำมาก ระบบจะวัดความบริสุทธิ์ของตัวอย่างที่มีปริมาณไซติซีนต่ำได้อย่างแม่นยำ เอาชนะความไวต่อการรบกวนสิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้องกับวิธี UV spectrophotometry และการไทเทรตได้อย่างมีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม เนื่องจากต้นทุนอุปกรณ์ที่สูงและขั้นตอนการทดสอบที่ซับซ้อน วิธีการนี้ไม่เหมาะสำหรับการทดสอบเป็นชุดตามปกติในโรงงาน
IV. การวัดค่าความร้อนด้วยการสแกนดิฟเฟอเรนเชียล (DSC): การกำหนดความบริสุทธิ์สำหรับวัสดุอ้างอิงและการตรวจสอบยืนยันผลิตภัณฑ์ที่มีความบริสุทธิ์สูง-
DSC เป็นวิธีการหลักในการกำหนดค่าความบริสุทธิ์ให้กับวัสดุอ้างอิงที่ได้รับการรับรองระดับชาติและมาตรฐานอ้างอิงที่มีความบริสุทธิ์สูง- (มากกว่าหรือเท่ากับ 99.5%) ของไซติซีน โดยจะกำหนดความบริสุทธิ์ตามความแตกต่างของคุณสมบัติทางความร้อน และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจสอบความบริสุทธิ์ของ-มาตรฐานอ้างอิงระดับสูงและการวิจัย-เกรดสูง-ไซติซีนที่มีความบริสุทธิ์สูง ซึ่งถือเป็นวิธีการตรวจจับที่แม่นยำที่สุดวิธีหนึ่งในอุตสาหกรรม
วิธีนี้ไม่จำเป็นต้องปรับสภาพตัวอย่างที่ซับซ้อน โดยจะคำนวณปริมาณสารเจือปนและความบริสุทธิ์อย่างแม่นยำโดยการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงการไหลของความร้อนในระหว่างกระบวนการหลอมเหลวของตัวอย่าง และเปรียบเทียบผลลัพธ์กับเทอร์โมแกรมของมาตรฐานอ้างอิง ซึ่งให้ความเสถียรและความแม่นยำเป็นพิเศษ ตามมาตรฐานระดับชาติสำหรับวัสดุอ้างอิงที่ได้รับการรับรอง วัสดุอ้างอิงไซติซีนจะต้องผ่านการกำหนดค่าความบริสุทธิ์โดยใช้วิธี HPLC และ DSC ร่วมกันก่อนจึงจะสามารถออกพารามิเตอร์ความบริสุทธิ์ที่เป็นไปตามข้อกำหนดได้
V. วิธีการตรวจจับเสริมแบบดั้งเดิม (ค่อยๆ หมดไป สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น)
การดูดกลืนรังสียูวีและการไตเตรทกรด-มักใช้ในอุตสาหกรรมในอดีตเพื่อกำหนดความบริสุทธิ์ของไซติซีน ปัจจุบันมีการใช้เพื่อการประมาณค่าความบริสุทธิ์อย่างรวดเร็วในผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบเกรดต่ำ-เท่านั้น UV spectrophotometry กำหนดเนื้อหาตามการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นเฉพาะ ในขณะที่การไทเทรตอาศัยกรด-การทำให้เป็นกลางสำหรับการหาปริมาณ แม้ว่าทั้งสองวิธีจะใช้งานง่ายและต้องใช้เงินลงทุนในอุปกรณ์เพียงเล็กน้อย แต่ก็มีข้อเสียที่สำคัญ นั่นคือ มีความไวสูงต่อการรบกวนจากสิ่งเจือปน เช่น อัลคาลอยด์อื่นๆ กรดอินทรีย์ และเม็ดสี ซึ่งส่งผลให้เกิดข้อผิดพลาดในการตรวจวัดอย่างมาก ด้วยเหตุนี้ จึงเหมาะสำหรับตัวอย่างธรรมดาที่มีความบริสุทธิ์สูงและมีระดับสิ่งเจือปนต่ำเท่านั้น ไม่สามารถปฏิบัติตามมาตรฐานการควบคุมคุณภาพอุตสาหกรรมและการปฏิบัติตามข้อกำหนดในปัจจุบันได้ โดยส่วนใหญ่ถูกแทนที่โดย HPLC
วี. ข้อควรพิจารณาที่สำคัญสำหรับการทดสอบ (แนวทางปฏิบัติมาตรฐานอุตสาหกรรม)
1. การบำบัดตัวอย่างล่วงหน้า-: ก่อนการทดสอบ ตัวอย่างไซติซีนที่เป็นของแข็งทั้งหมดจะต้องทำให้แห้งที่ 105 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงจนกว่าจะได้น้ำหนักคงที่เพื่อขจัดความชื้นที่ถูกดูดซับ ซึ่งจะช่วยป้องกันความชื้นจากการเจือจางสารออกฤทธิ์และทำให้การอ่านค่าความบริสุทธิ์ต่ำเกินจริง หลอดบรรจุวัสดุอ้างอิงมาตรฐานต้องใช้ทันทีหลังจากเปิด และไม่สามารถปิดผนึกเพื่อนำกลับมาใช้ใหม่ได้
2. การควบคุมสิ่งเจือปน: ตัวอย่างที่ได้มาจากพืช-จำเป็นต้องมีการทำให้บริสุทธิ์อย่างละเอียดเพื่อกำจัดโพลีแซ็กคาไรด์ ฟลาโวนอยด์ และอัลคาลอยด์อื่นๆ ที่ตกค้าง ดังนั้นจึงป้องกันไม่ให้สิ่งเจือปนรบกวนจุดสูงสุดของโครมาโตกราฟีและทำให้ผลการทดสอบลดลง
3. การเลือกวิธีการ: ใช้ TLC ในการคัดกรองผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบเบื้องต้น HPLC ได้รับเลือกสำหรับการควบคุมคุณภาพผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปทางอุตสาหกรรม เลือก LC-MS/MS สำหรับตัวอย่างที่มีเมทริกซ์เชิงซ้อน และมีการใช้ HPLC และ DSC ร่วมกันเพื่อการทดสอบ-มาตรฐานที่มีความบริสุทธิ์สูง
สรุป
ได้มีการสร้างระบบอุตสาหกรรมแบบลำดับชั้นสำหรับการทดสอบความบริสุทธิ์ของไซติซีน HPLC ได้กลายเป็นมาตรฐานหลักสำหรับการผลิตทางอุตสาหกรรมและการค้าเชิงพาณิชย์ เนื่องจากความถูกต้องแม่นยำ ประสิทธิภาพ และต้นทุน-ประสิทธิผล TLC เหมาะสำหรับการคัดกรองเบื้องต้นอย่างรวดเร็ว ในขณะที่ LC-MS/MS และ DSC ตรงตามข้อกำหนดการทดสอบที่มีความแม่นยำสูง-สำหรับตัวอย่างที่ซับซ้อนและมาตรฐานความบริสุทธิ์สูง- ตามลำดับ แต่ละวิธีมีบทบาทเฉพาะ โดยร่วมกันสร้างโซลูชันที่ครอบคลุมสำหรับการทดสอบความบริสุทธิ์ของไซติซีน
มณฑลส่านซี Lv Ke Chun Yuan Biotechnology Co., Ltd
ที่อยู่ของเรา
Huaxia Yue World เขตเว่ยปิน เมืองเป่าจี มณฑลส่านซี
หมายเลขโทรศัพท์
+86-13571783771
อีเมล-
